Metoda Bradford
Metoda Bradford (cunoscută și sub numele de metoda Coomassie) a fost dezvoltată de Marion M. Bradford în 1976.[1] Este o procedură analitică spectroscopică rapidă și precisă,[2] fiind utilizată pentru a măsura concentrația proteinelor într-o soluție. Reacția este dependentă de compoziția în aminoacizi a proteinelor măsurate.
Principiu
[modificare | modificare sursă]Metoda se bazează pe schimbarea colorației cu reactivul Coomassie Brilliant Blue G-250 în prezența proteinelor, ceea ce este detectabil prin spectrofotometrie (este astfel o metodă colorimetrică). Colorantul Coomassie există în trei forme: anionică (albastră), neutră (verde) și cationică (roșie).[3] În condiții acide, forma roșie a colorantului se transformă în forma sa albastră, prin legarea de proteina din soluția de testat. Dacă nu există nicio proteină care să se lege, atunci soluția va rămâne brună-maro. Colorantul formează un complex puternic, non-covalent, cu gruparea carboxil a proteinei, prin intermediul forțelor van der Waals și cu gruparea amino prin interacțiuni electrostatice.[1]
Note
[modificare | modificare sursă]- ^ a b Ninfa, Alexander J; Ballou, David P; Benore, Marilee (). Fundamental Laboratory Approaches for Biochemistry and Biotechnology. Wiley. p. 113.
- ^ Bradford, Marion (). „A Rapid and Sensitive Method for the Quantification of Microgram Quantities of Protein Utilizing the Principle of Protein-Dye Binding” (PDF). Analytical Biochemistry. 72 (1–2): 248–254. doi:10.1006/abio.1976.9999. PMID 942051 – via Google Scholar.
- ^ „Quick Start TM Bradford Protein Assay” (PDF). www.bio-rad.com.
.svg){kind=small}